貨號:AZ00003
儲運條件
-20℃
產(chǎn)品組成
產(chǎn)品簡介
All-in-One RT SuperMix for qPCR(with dsDNase) 是一款便捷、減少污染的高質(zhì)量一鏈cDNA 合成試劑盒,包含M-MLV GIIIReverse Transcriptase 及其反應Buffer、RNA 酶抑制劑、dNTPs,Oligo(dT)20VN 和隨機引物等一鏈cDNA 合成所需的所有組分,僅需加入RNA 模板和水即可開始反應。All-in-One RT SuperMix for qPCR(withdsDNase) 作為升后的一鏈cDNA 合成試劑盒,15 分鐘內(nèi)長可獲得12 kb cDNA,產(chǎn)物可用于qPCR、普通PCR 等實驗。從組織或細胞中提取的RNA 往往殘留基因組DNA 污染,如果反轉(zhuǎn)錄不做去除處理,下游進行qPCR 反應時基因組DNA 與cDNA會同時進行擴增,尤其是引物設計在同一外顯子上時,影響定量準確性。本試劑盒所采用的dsDNase 能夠特異性消化雙鏈DNA 或DNARNA雜合雙鏈中的DNA,并且具有熱敏感性,在逆轉(zhuǎn)錄反應溫度下即可快速不可逆地失活。與傳統(tǒng)使DNase I 去除基因組DNA 污染的方法相比,dsDNase 無需額外加入EDTA 進行失活,不僅節(jié)省實驗時間,而且降低了對逆轉(zhuǎn)錄反應的抑制。可依據(jù)基因組DNA 污染嚴重程度,選擇去基因組DNA 污染與反轉(zhuǎn)錄分開進行,或者去基因組DNA 污染與反轉(zhuǎn)錄一步進行的操作方法。
使用方法
針對基因組DNA 含量低的RNA 樣品(推薦方案)
① 于冰上配制如下反應體系:
a. 推薦使用試劑盒提取的高質(zhì)量RNA 作為模板。
② 輕柔吸打混勻,瞬離;
③ 37℃溫育2 min,以去除基因組DNA 污染;
④ 55℃溫育15 min;
⑤ 反應結束后,85℃溫育2 min 以終止反應;
⑥ 迅速將獲得的cDNA 置于冰上,用于后續(xù)實驗;或立即保存于-20℃。
針對基因組DNA 含量高RNA 樣品
1. 基因組DNA 污染去除
① 于冰上配制如下反應體系:
a. 推薦采用試劑盒提取的RNA 作為模板。
② 輕柔吸打混勻,瞬離;
③ 37℃溫育2 min,以去除基因組DNA 污染;
注:若RNA 中基因組DNA 污染嚴重,可適當延長37℃溫育時間至5 min。
④ 65℃溫育2 min,使dsDNase 失活,然后置于冰上。
2. diyi鏈cDNA 合成
① 于冰上配制如下反應體系:
② 輕柔吸打混勻,瞬離;
③ 50℃溫育15 min;
注:若目標RNA 不含Poly(A) 結構,可預先25℃溫育10 min。
④ 反應結束后,85℃溫育2 min,以終止反應;
⑤ 將獲得的cDNA 溶液置于冰上,用于后續(xù)實驗。
注:cDNA 溶液置于-20℃儲存,建議不超過1 周;置于-80℃可儲存。
注意事項
預混液中已經(jīng)包含Oligo(dT)20VN 和隨機引物,不僅適用于包含Poly(A) 結構的真核生物mRNA,也適用于不含Poly(A) 結構的原核生物RNA、真核生物rRNA 和tRNA 等模板,但不適用于miRNA 等小RNA 模板。
美國Azaood公司成立于2004年,是一家開發(fā)和生產(chǎn)用于生命科學研究、診斷和生物技術應用的高質(zhì)量純化酶、蛋白質(zhì)、核酸和細胞分離試劑盒、胎牛血清的行業(yè)導者;Azood公司是通過了ISO9001認證的主要制造商,可以滿足從研究到大規(guī)模批量生物加工和OEM應用與要求的公司。
15021202164
上海市楊浦區(qū)國康路100號2層
一鍵分享網(wǎng)站到: