NuSmart®核酸直接釋放技術(shù)在細(xì)菌鑒定中應(yīng)用
——5分鐘搞定各種細(xì)菌
細(xì)菌屬于原核生物的一種,雖然結(jié)構(gòu)相對簡單,但是在生物界屬于數(shù)量最多的一類生物。細(xì)菌在生物界扮演著多重角色,既有乳品生產(chǎn)、抗生素生產(chǎn)、廢水處理等積極的一面,也有作為病原菌感染人和牲畜從而導(dǎo)致疾病傳播的危害一面。所以了解和控制細(xì)菌的特征和特性,對日常生產(chǎn)生活至關(guān)重要。
實(shí)驗(yàn)室條件下,細(xì)菌的鑒定主要有培養(yǎng)、生化鑒定、血清學(xué)鑒定等,但是這些方法均費(fèi)時(shí)費(fèi)力,尤其是細(xì)菌培養(yǎng)。而分子生物學(xué)方法是近年來更多被應(yīng)用的方法,例如PCR技術(shù)。尤其對不易生長,培養(yǎng)條件復(fù)雜,未知細(xì)菌等表現(xiàn)良好??偨Y(jié)發(fā)現(xiàn)PCR在細(xì)菌中的應(yīng)用包括以下方向:
1、基于16S rDNA基因的快速鑒定;
2、特異性基因的鑒定,例如毒力基因、耐藥基因等;
3、食品微生物檢測;
4、細(xì)菌數(shù)量動態(tài)檢測;
5、常見呼吸道病原菌篩查;
6、細(xì)菌DNA圖譜制作等。
對于實(shí)驗(yàn)室工作人員來說,面臨著細(xì)菌難培養(yǎng),細(xì)菌增殖數(shù)量不夠,環(huán)境中細(xì)菌復(fù)雜程度高等難點(diǎn)。而能夠成功培養(yǎng)到目標(biāo)細(xì)菌,且數(shù)量達(dá)標(biāo)是PCR的關(guān)鍵前提。目前實(shí)驗(yàn)室工作人員常用細(xì)菌DNA柱式提取試劑盒進(jìn)行基因組DNA的提取純化。該方法作為經(jīng)典方法長期被使用,但是整個(gè)操作過程需要40-90分鐘不等,使用溶菌酶和蛋白酶K等生物活性酶類,多次反復(fù)離心,步驟繁多、使初學(xué)的操作者體驗(yàn)樂趣嚴(yán)重降低。我司開發(fā)的NuSmart®微生物 PCR 試劑盒可以解決以上痛點(diǎn)問題。優(yōu)點(diǎn)如下:
—對樣本量要求低(1-2uL菌液,1個(gè)菌斑)
—操作快速(5分鐘釋放基因組DNA)
—操作簡單
—檢出率達(dá)99.99%
案例A 對數(shù)生長期細(xì)菌快速擴(kuò)增16S rDNA
革蘭氏陰性菌:1 大腸桿菌 2 胞曼氏不動桿菌 3 肺炎克雷伯菌 4 奇異變形桿菌 5 銅綠假單胞菌
革蘭氏陽性菌:6 蠟狀芽孢桿菌 7 糞腸球菌 8 肺炎鏈球菌 9 金黃色葡萄球菌 10 假中間葡萄球菌
使用NuSmart®微生物 PCR 試劑盒(貨號Nu-Mi01)處理對數(shù)生長期菌液,2× MIC Smart Mix擴(kuò)增16S rDNA基因。
案例B 菌斑快速擴(kuò)增16S rDNA
革蘭氏陰性菌:1 大腸桿菌 2 胞曼氏不動桿菌 3 肺炎克雷伯菌 4 奇異變形桿菌 5 銅綠假單胞菌
革蘭氏陽性菌:6 蠟狀芽孢桿菌 7 糞腸球菌 8 肺炎鏈球菌 9 金黃色葡萄球菌 10 假中間葡萄球菌
使用NuSmart®微生物 PCR 試劑盒(貨號Nu-Mi01)處理菌斑(至于生理鹽水中),2× MIC Smart Mix擴(kuò)增16S rDNA基因。
案例C 甘油菌快速擴(kuò)增16S rDNA
革蘭氏陰性菌:1 大腸桿菌 2 胞曼氏不動桿菌 3 肺炎克雷伯菌 4 奇異變形桿菌 5 銅綠假單胞菌
革蘭氏陽性菌:6 蠟狀芽孢桿菌 7 糞腸球菌 8 肺炎鏈球菌 9 金黃色葡萄球菌 10 假中間葡萄球菌
使用NuSmart®微生物 PCR 試劑盒(貨號Nu-Mi01)處理甘油菌,2× MIC Smart Mix擴(kuò)增16S rDNA基因。
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